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quarta-feira, 5 de agosto de 2015
A assinatura celular de células do sistema imunológico urinário em nefrite lúpica: novos insights sobre potenciais biomarcadores
Arthritis Research & Therapy201517 : 94
DOI: 10,1186 / s13075-015-0600-y
ARTIGO DE PESQUISA
A assinatura celular de células do sistema imunológico urinário em nefrite lúpica: novos insights sobre potenciais biomarcadores
Katharina Kopetschke , Jan Klocke , Anna-Sophie Grießbach , Jens Y Humrich , Robert Biesen , Duska Dragun , Gerd-Rüdiger Burmester , Philipp Enghard e Gabriela Riemekasten
Resumo
Introdução
As células T urinário representam um biomarcador não invasivo confiável para nefrite lúpica proliferativa (LN). Pouco se sabe a respeito da presença de subconjuntos de células T, células B e macrófagos na urina, embora possam melhorar ainda mais a validade de biomarcadores celulares urinários para ln.
Métodos
Foram analisadas amostras de sangue e urina contemporâneas de pacientes com LN ativa (n = 19), outros Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) pacientes (n = 79) e amostras de urina de pacientes com nefropatia diabética (DN; n = 14) e anti-neutrófilos anticorpo citoplasmática (ANCA) vasculite associada (AAV; n = 11) por citometria de fluxo.
Resultados
Os números de células T urinária, células B e macrófagos correlacionou com a actividade da doença e foram significativamente maiores no grupo activo LN. As células T urinárias mostrou excelente distinção de pacientes com LN ativa, as células T CD8 + (AUC de ROC = 1,000) e células T CD4 + (AUC = 0,9969) igualmente. Células B CD19 + (AUC = 0,7823) e CD14 + macrófagos (AUC = 0,9066), bem como o padrão proteinúria clínica (AUC = 0,9201), não conseguiram alcançar estes padrões elevados. Os pacientes com ND ou de AAV também mostraram um aumento da contagem de células urinárias, embora o / CD8-razão CD4 foi significativamente menor em comparação com LES em DN (p = 0,0006). As células T CD4 + urinário de doentes LN activas revelou-se principalmente de fenótipo de memória efectora e expressa significativamente mais do que o CD40L e Ki67 glóbulos correspondente. Contagens Treg urinário correlacionada com a atividade da doença.
Conclusões
Apesar da contagem de células urinárias detectáveis de células B e macrófagos, células T permanece a melhor biomarcador celular urinária de LN. A / CD8-baixa razão CD4 parece ser característica LN.
Abreviações
AAV:
anti-anticorpo de neutrófilos citoplasmática vasculite associada
ANCA:
anticorpo anti-citoplasmática de neutrófilos
APC:
aloficocianina, corante fluorescente
AUC:
área sob a curva
Aza:
azatioprina
Belim:
belimumab
BSA:
albumina de soro bovino
BVAS:
Birmingham vasculite escore de atividade
CCR:
Receptor de quimiocina CC-motivo
CD:
aglomerado de diferenciação
Cy5, Cy7:
corantes de cianina fluorescentes
Cyc:
ciclofosfamida
DN:
nefropatia diabética
DRFZ:
German Research Center Rheumatism
FITC:
isotiocianato de fluoresceína, corante fluorescente
lúpus eritematoso sistêmico índice de atividade da doença
Introdução
Nefrite lúpica (LN) é uma das manifestações mais comuns de lúpus eritematoso sistêmico (LES) [ 1 ]. Embora a terapia tem melhorado ao longo dos anos, LN ainda é uma das complicações mais ameaçadores que implicam o risco de insuficiência renal terminal e aumento da mortalidade [ 2 ]. Cuidados atual de pacientes com LN pode ainda ser melhorada através da criação de novos biomarcadores para o diagnóstico ea monitorização do tratamento, facilitando o diagnóstico precoce e ajudando a evitar sobre- e sub-tratamento [ 3 , 4 ].
A biopsia renal é normalmente aplicada para diagnosticar LN em pacientes com SLE com uma combinação de actividade de doença sistémica e marcadores urinários anormalmente elevados, tais como proteinúria [ 5 ]. A imprecisão potencial dos marcadores urinários estabelecidos e o risco de biópsia invasiva [ 6 ] conduziu à procura de alternativas biomarcadores. Embora ambos soro e urina foram analisadas para marcadores viáveis, os compostos urinárias são geralmente considerados como mostram um melhor reflexo da inflamação renal e dano irreversível do rim [ 7 - 9 ].
Em um estudo recente, fomos capazes de mostrar que as amostras de urina de pacientes com LN proliferativa aguda contêm grandes quantidades de células T CD3 + CD4 +, que podem ser avaliados por análise de citometria de fluxo de [ 10]. A contagem de células T pode ser utilizada como um biomarcador para LN proliferativa entre os pacientes com LES [ 10 ,11 ]. As células urinárias são também um correlato fenotípica da infiltração intersticial do rim [ 12 , 13 ], que é um elemento comum do LN e correlaciona-se de perto com a actividade da doença e lesão renal [ 14 - 16 ]. Esta semelhança conduz à hipótese de que as células urinárias originam a partir do rim inflamada, em vez de sangue periférico. As células do infiltrado são formados principalmente por células T, mas também de macrófagos, células B e células de plasma [ 16 - 18 ].Com base na nossa hipótese, outros tipos de células para além de células CD3 + CD4 + também deveriam ser detectáveis na urina de pacientes LN e podem ser utilizados como biomarcadores.
A urina - e em particular as células urinárias - pode, possivelmente, ser utilizado de forma não invasiva para explorar os componentes celulares do ambiente inflamatória renal. Além disso, a avaliação de células urinárias podem produzir marcadores preditivos de desfecho, a resposta terapêutica dos pacientes ou futuros alargamentos nefrite. Nós e outros previamente demonstrado que as células T urinários são encontrados também em outras nefropatias com infiltração inflamatória, tais como a nefropatia diabética (DN) ou anticorpo anti-citoplasmática de neutrófilos (ANCA) -associated vasculite (AAV) [ 10 , 19 ]. Como ainda não há provas sobre se existem diferenças entre as doenças na ocorrência ou composição de células urinárias.
No presente estudo foi analisado o perfil celular urinária de pacientes com LES, DN e AAV para células T e seus subconjuntos, células B e macrófagos, a fim de obrain uma visão completa das células urinárias em LES, e refinar ainda mais seu valor diagnóstico como biomarcadores para LN.
Métodos
Aprovação de Ética
Ética aprovação foi obtido a partir do Ethikkomission Charit .
Os pacientes
No período entre abril de 2009 e março de 2013, um total de 123 pacientes foram recrutados para este estudo (para características detalhadas do paciente ver Tabela 1 ). Foram coletadas e analisadas amostras de 98 pacientes com LES, 14 pacientes com DN e 11 pacientes com AAV.
Os valores são média (gama) a menos que indicado de outra forma. Aza, azatioprina; Belim, belimumab; BVAS, Birmingham Vasculitis Activity Score; Cyc, pulso ciclofosfamida; HCQ, hidroxicloroquina; Flebo, Flebogamma; MMF, o micofenolato de mofetil; MTX, metotrexato; na, não aplicável; Pred, prednisolona; Rtx, rituximab; LES, lúpus eritematoso sistémico; SLEDAI, lúpus eritematoso índice de atividade da doença sistêmica.
Nós dividimos a população SLE em um grupo com envolvimento renal ativa (n = 19) e um grupo com envolvimento renal não-ativos (n = 79). O lúpus eritematoso sistêmico índice de atividade da doença (SLEDAI) foi calculada para todos os pacientes. Envolvimento renal activa foi definida pela alta atividade geral da doença (SLEDAI ≥10) e uma biópsia renal atual (não mais de 4 semanas) mostrando LN (n = 14). Na ausência de uma biópsia, o envolvimento renal activa foi definida pela elevada actividade da doença (SLEDAI ≥10) e, pelo menos, dois elementos do SLEDAI renal (n = 5). Todas as biópsias examinadas mostrou classe IV (n = 10) ou classe IV + V (n = 3), exceto um caso de glomerulonefrite pauci imunológico (ver arquivo adicionais 1 : Tabela S1).
Clínicas dados de acompanhamento de 6 meses após a inclusão no estudo foram retrospectivamente recuperados dos arquivos médicos e estavam disponíveis para os pacientes com LN inicialmente ativa e 20 pacientes com LES que inicialmente tinham nenhuma doença ou tiveram levemente doença ativa (SLEDAI <10). Se os dados de acompanhamento de 6 meses não estavam disponíveis, dados de acompanhamento recolhidos 5 ou 7 meses após a análise de urina foram aceites como um substituto. A remissão foi definida como uma redução na proteinúria em pelo menos 50% e melhora ou estabilização da creatinina 6 meses após início da terapêutica para LN proliferativa; doença refratária foi definida como a incapacidade de atingir a remissão. Em nossa coorte de oito pacientes com LN ativa, cinco obtiveram remissão.Desenvolvimento de um novo surto renal foi definida como um aumento ou agravamento da proteinúria creatinina atribuído à actividade SLE pelo médico assistente. Em nossa coorte dois pacientes desenvolveram um novo surto renal.
Os conjuntos de dados de 71 doentes com SLE foram incluídos na análise de células urinárias, e a análise do subconjunto de células T foi realizado em 53 doentes com SLE. Devido ao número de células urinárias limitados nem todas as provas poderão ser realizadas em todos os pacientes. Nenhum paciente foi excluído após a análise.
Nossa coorte AAV consistiu de oito casos de granulomatose com poliangeíte (anteriormente conhecido como granulomatose de Wegener) e três pacientes com doença perinuclear associada a ANCA. Todos os pacientes tiveram envolvimento renal relacionada com AAV. Atividade da doença AAV foi medida pelo escore de atividade vasculite Birmingham (BVAS).
As amostras foram coletadas de pacientes do Departamento de Reumatologia e Imunologia Clínica e Nefrologia do Hospital Universitário Charité, de Berlim, Alemanha. O comitê de ética do Hospital Universitário Charité (Charité EA1 / 034/10) aprovou o estudo. O consentimento informado foi obtido de todos os pacientes antes da participação.
A preparação das amostras e citometria de fluxo
As amostras de urina foram recolhidas e imediatamente centrifugado. As peletes foram lavadas com PBS / BSA. O tamanho médio da amostra foi de 100 ml de urina. Para garantir uma elevada percentagem de células urinárias vivo durante as medições, apenas a urina fresca foi analisado, enquanto as amostras com mais de 6 h foram descartados. As células mononucleares de sangue periférico foram obtidas por incubação de amostras de sangue fresco durante 20 minutos a 4 ° C com tampão de lise de eritrócitos e lavar com PBS / BSA. As células foram coradas com CD3-PE, CD4-PE, CD4-FITC, CD8-PE / Cy7, CD14-PerCP / Cy5.5, CD25-FITC, CD28-PerCP / Cy5.5, CD40L-FITC, CD45RO-APC, CD127-APC, CCR7-FITC e FoxP3-Alexa488 (todos BioLegend, San Diego, CA, EUA), a APC-CD3 / Vio770 e CD25-APC (ambos Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Alemanha), CD4-Cy5, CD8- FITC, CD14-FITC e CD19-Cy5 (todos DRFZ) e CD127-eFluor (eBioscience, San Diego, CA, EUA).
Para bloquear a ligação não específica, as células foram coradas em PBS / BSA contendo 10% de IgG humana (Flebogamma; Grifols, Langen, Alemanha); para excluir as células mortas, ou iodeto de propídio (Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemanha) ou diamidino fenilindole (Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemanha) foi adicionado imediatamente antes da citometria de fluxo. Em caso de fixação, a exclusão de células mortas foi conseguido por um kit de discriminação celular Morto (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Alemanha). Para calcular o número de células, o tamanho das amostras definidas foram adquiridos e o número de células normalizada, tal como células / dl da amostra de urina inicial. As amostras foram medidas utilizando um citómetro de fluxo Calibur (BD Pharmingen, Heidelberg, Alemanha) e um Analisador de Quant MACS (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Alemanha). Os conjuntos de dados foram analisados utilizando FlowJo Software (Árvore Star, Ashland, OR, EUA).
Valores laboratoriais de rotina
Valores laboratoriais de rotina para a creatinina sérica e proteinúria foram adicionalmente recolhidas. A creatinina foi medida pela reacção Jaffe, 24 h excreção urinária de proteínas utilizando um ensaio de turbimetric.
Análise estatística
Medianas, Mann-Whitney, Wilcoxon pareadas, correlação de Spearman e operador receptor característica (ROC) foram calculados utilizando GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA).
Resultados
Pacientes com LN ativa tinham elevadas quantidades de células urinárias
Amostras de urina de pacientes com alta atividade da doença (SLEDAI ≥10) e recente LN comprovada por biópsia (n = 14) ou atividade da doença renal elevada (SLEDAI ≥10 e SLEDAI renal ≥8, n = 5) teve um elevado número de CD4 + ( medianos 1415 células / dl de urina) e células T CD8 + (mediana 1911 células / dl de urina). Mesmo números maiores de células CD14 + urinário macrófagos foram observadas com uma média de 33.808 células / dl de urina (n = 19). Em comparação, as células B CD19 + (231cells / dl mediana urina) foram apenas moderadamente aumentada na urina de pacientes activos (n = 10) (Figura 1 A e B).
Figura 1
Células urinárias em lupus eritematoso sistêmico (LES) pacientes e em pacientes com diferentes nefropatias. (A) examplary dot-parcelas da análise flowcytometric de células T urinária, células B e monócitos em um paciente com nefrite lúpica prolif erativa aguda (LN). (B - E) células urinárias em pacientes com LN aguda proliferativa (B) , outros pacientes com LES (C) , pacientes com nefropatia diabética (DN) (D) e pacientes com vasculite ANCA-associado (AAV) (E) .
Em pacientes com LES sem envolvimento renal ativa foram detectados apenas números baixos de células T (mediana e 25 células T CD8 + / dl urina 29 CD4 +, n = 55). Com uma média de 29 células / dl de urina, as contagens de células B CD19 + foram semelhantes para as contagens de células T nesses pacientes (n = 29). No entanto, frequentemente observada uma quantidade considerável de macrófagos CD14 + na urina destes doentes, (mediana 264 células / urina dl, n = 29) (Figura 1C). As diferenças nas contagens de células urinárias entre pacientes com SLE activo e não-activo foram altamente significativos para CD3 + CD4 +, CD3 + CD8 + e células CD14 + ( P <0,0001) e em menor grau também de células CD19 + ( P = 0,0137). A actividade da doença (SLEDAI) correlacionada com as contagens de células urinárias de CD3 + CD4 + ( r = 0,7363, P <0,0001), CD3 + CD8 + ( r = 0,7641, P <0,0001), CD14 + ( r = 0,5715, P <0,0001) e As células CD19 + ( r = 0,4636, P<0,0030).
Em pacientes DN, foram detectadas uma mediana de 262 células CD4 + e 82 células CD8 + T urinário, que foi ligeiramente mais elevada do que a contagem B CD19 + de células (mediana 69 / dl) e consideravelmente inferior aos números de CD14 + de macrófagos (mediana 3770 / dl) (Figura 1 D ). Os doentes com AAV teve contagens de linfócitos urinário variáveis, enquanto macrófagos urinários foram detectável em todas as amostras (Figura 1 E). As contagens de células não se correlacionou com a BVAS (dados não mostrados).
/ CD8-razão CD4 foi deslocado para CD8 na urina de pacientes com LES e variada entre diferentes doenças renais
A fim de determinar as relações entre as contagens de células CD4 + e CD8 + urinário em diferentes doenças renais, uma razão CD4 / CD8 foi calculado para amostras de urina de pacientes com, pelo menos, 100 células CD3 + / dl urina. As coortes examinados consistiu de 38 pacientes com LES, 11 pacientes com DN e 7 pacientes com AAV (Figura 2 ).
Figura 2
Urinária CD4 / CD8-razão em várias doenças renais. Todos os doentes com contagens de células CD3 +> 100 / dL foram incluídos.LES, lúpus eritematoso sistémico; DN, nefropatia diabética; De AAV, vasculite associada a ANCA.
Considerando pacientes com LES tiveram tipicamente ligeiramente superior urinária CD8 + do que a contagem de células T CD4 + (mediana 0,696 CD4 urinária / CD8-ratio), independentemente da atividade da doença ou envolvimento renal conhecida, os pacientes com grave DN mostrou proporções recíprocas na maioria dos casos (mediana 2.306 CD4 urinária / CD8 -ratio). A diferença entre CD4 / CD8 urinária-ratios em pacientes com LES e DN foi altamente significativa ( P = 0,0006).Os doentes com AAV teve uma alta gama de CD4 / CD8-ratios (mediana 1.826 CD4 / CD8-ratio, variando 0,085-4,067), que não se correlacionam com o BVAS. Comparando as proporções de pacientes com LES de AAV ( P = 0,2591) ou pacientes DN ( P = 0,2391) não conduziu a resultados significativos. Outros rácios formados, CD3 / CD14 e CD3 / CD19, não deu quaisquer diferenças significativas entre as doenças, ou (dados não mostrados).
Subtipagem de células T CD4 + urinário em LN
Para avaliar o fenótipo de células T CD4 + urinários, amostras de urina e de sangue de 10 doentes com SLE com LN proliferativa aguda foram analisadas para vários marcadores de superfície de células T, bem como marcadores intracelulares Ki-67 e FoxP3 (Figura 3 ). Todos os pacientes tinham ou submetido recentemente a biópsia renal (n = 9) ou tiveram alta acitivity global da doença e atividade da doença renal (SLEDAI ≥10 e SLEDAI renal ≥8, n = 1). Total de T subtipo celular contagens também foram medidos em amostras de urina adicionais de 43 pacientes com LES sem envolvimento renal aguda.
Figura 3
Subtipagem das células T CD4 + no lúpus eritematoso sistêmico (LES) pacientes na urina e no sangue periférico. Círculos preenchidos = urina; Círculos abertos = sangue periférico. (A) Expressão de CD40L em células T CD4 + (n = 7). (B) de memória efectora (CD45RO + CCR7-), memória central (CD45RO + CCR7 +) e ingénuos (CD45RO-CCR7 +) T helper células (n = 7). (C) índice de proliferação como medido por Ki-67 de células T CD4 + (n = 10). (D) células reguladoras (CD127-FoxP3 +) T CD4 + (Treg) (n = 10). (E)Expressão de CD25 e Ki-67 em Treg (n = 10).
As células T CD4 + urinário teve uma expressão significativamente mais elevada de marcador de activação de CD40L em comparação com o sangue periférico ( P = 0,0156). O fenótipo das células urinárias foi deslocado para uma percentagem mais elevada de efector de memória células tipo T helper (CD45RO + CCR7-) ( P = 0,0156), enquanto que as células T ingénuas menos (CD45RO-CCR7 +) foram encontrados na urina ( P = 0,0156) quando comparado com o sangue periférico.Não foram detectadas diferenças entre urina e sangue CD4 + células T para a frequência de memória central (CD45RO + CCR7 +), as células CD127-FoxP3 + T reguladoras (Tregs) e CD25 + Tregs. A taxa de proliferação celular tal como medido por Ki-67 de ambas as células T CD4 + globais e Treg foi significativamente aumentada na urina ( P = 0,0156 e 0,0313, respectivamente). Análise do marcador de superfície CD28, não deu quaisquer diferenças significativas entre a urina e no sangue tanto para as células T CD8 + ou CD4 + (dados não mostrados).
Correlação entre a contagem de células urinárias de todas as amostras de doentes medidos com o SLEDAI não foi significativa para as contagens de células urinárias de CD40L +,, memória efetoras ingênuo ou células T de memória central. Treg, no entanto, relacionada com a actividade da doença (n = 22, r = 0,5551, P <0,0073).
Valor diagnóstico de células urinárias
As curvas ROC foram usadas para calcular e comparar a sensibilidade e especificidade de diferentes tipos de células urinárias e subconjuntos de células T para a identificação de LN proliferativa aguda em pacientes com LES (figura 4 ). Para efeitos de comparação, os cálculos adicionais ROC para os marcadores aprovado proteinúria clínica e de creatinina no soro foram feitas. O grupo controle foi composto de outros pacientes com LES sem doença renal activa ou sem doença renal em tudo.
Figura 4
Characteristic (ROC) curva Receiver operater para o diagnóstico de nefrite lúpica proliferativa (LN) entre lúpus eritematoso sistêmico (LES) pacientes com vários tipos de células urinárias. (A) células T CD3 + CD4 + T; (B) células T CD3 + CD8 +; (C) de células B CD19 +; (D) CD14 + macrófagos. AUC, área sob a curva.
De todos os marcadores testados (Tabela 2 ), as células T CD8 + apresentaram o maior valor de diagnóstico com uma área sob a curva ROC (AUC) de 1,000. As células T CD4 + realizadas igualmente bem (AUC = 0,9969) e melhor do que o estabelecido marcadores laboratoriais proteinúria (AUC = 0,9201) ou de creatinina sérica (AUC = 0,6031). As células CD19 + B e macrófagos urinário CD14 + não conseguiram alcançar estes padrões elevados, enquanto que subtipos de células T CD4 + não deu qualquer melhoria do marcador.
Tabela 2
ROC para o diagnóstico LN proliferativa entre os pacientes com LES com vários tipos de células urinárias como marcadores
Marcador examinou
Os pacientes
Controles
Área sob a curva ROC
Cortar
Sensibilidade
Especificidade
(N =)
(N =)
(%)
(%)
uCD3 + CD8 +
17
55
1,0000
> 650 células / dl
100
100
uCD3 + CD4 +
19
55
0,9982
> 270 células / dl
100
98,25
CCR7-CD45RO +
6
34
0,9832
> 300 células / dl
100
94,12
CCR7 + CD45RO +
6
34
0,8172
> 35 células / dl
85,71
79,41
CCR7 + CD45RO-
6
34
0,7941
> 45 células / dl
100
52,94
CD40L +
6
34
0,9706
> 100 células / dl
100
70,59
CD127-FoxP3 +
7
13
0,9017
> 5 células / dl
77,78
84,44
Proteinúria
16
45
0,9201
> 620 mg / d
93,75
83,87
uCD14 +
17
31
0,9066
> 1700 células / dl
94.74
83,87
uCD19 +
10
31
0,7823
> 75 células / dl
90
70,97
Creatinina
19
55
0,6031
> 1,1 mg / dL
47.37
79.17
Organizadas de acordo com área sob a característica operador receptor (ROC); corte determinado pelo índice de Youden.
Para avaliar se uma determinada composição de células imunes urinária prediz um curso clínico, 6 (+/- 1) dados de acompanhamento clínicos -mês foram recuperados de arquivos de pacientes. Seguimento clínico estava disponível para oito pacientes com LN inicialmente ativa, cinco dos quais atingiram remissão e três dos quais eram refratários. Não há diferenças significativas na urinária de células CD4 + T inicial, células T CD8 +, CD19 + ou células B CD14 + de macrófagos contagens foram observadas. Também não houve diferença entre LN refratário ou resposta à terapia para regulamentar células T CD4 + ou ki67 + contagem de células CD4 + T. Entre os 20 pacientes com não-ativo / ativo SLE levemente com 6 meses de acompanhamento clínico, 18 pacientes não apresentaram atividade da doença, enquanto uma sofreu grave, comprovada por biópsia classe IV LN LN e um outro paciente com classe conhecida V LN desenvolvido aumentou drasticamente proteinúria . Ambos os pacientes tinham moderadamente elevada contagem de células T urinária sete meses antes do novo alargamentos renais (mediana 316 células T CD4 + / dl e 268 células T CD8 + / dl), enquanto que todos os outros pacientes tinham células T urinário apenas marginalmente detectáveis (mediana 13 T CD4 + células / dl e 24 de células T CD8 + / dl).
Discussão
Esta investigação fornece informações sobre a ocorrência de vários tipos de células inflamatórias urinário no LES e sua relevância como um biomarcador para LN proliferativa. Os linfócitos T foram confirmados como biomarcador urinário mais fiável para LN activo, enquanto que os macrófagos e células B urinário falhou a emergir como biomarcadores de diagnóstico. Estas células urinárias não são únicos para LN, mas também estão presentes em outras doenças inflamatórias como a DN e de AAV. No entanto, o equilíbrio de células T parece ser urinário deslocado para as células T CD8 + em LN.
Relevância das células inflamatórias locais que se infiltram na patogênese da LN é bem estabelecida [ 20 ]. Histologia estudos relataram que a infiltração no LN intersticial é constituído principalmente por células T e, em menor medida, de macrófagos, células B e / plasmablasts -cells [ 21 ]. Vários autores descrevem um predomínio de células T CD4 + [ 17 , 21 ], enquanto outros relatam uma maioria de células T CD8 + [ 22 , 23 ]. Resolver esta contradição Winchester descrito diferentes padrões de infiltração em LN, alguns predominaram por CD4 + outros por células T CD8 + e também misturados infiltrações CD4 / CD8 [ 24 ]. Actualmente, a origem das células imunitárias na urina é desconhecida e a contribuição relativa dos periglomerular e infiltrados peritubulares e grande contribuição agregados intersticiais aos leucócitos urinário não é clara. No entanto as células na urina parece assemelhar-se a distribuição celular intra-renal, embora macrófagos são mais numerosos outros tipos de células na urina.
Surpreendentemente contagens elevadas de macrófagos urinário foram observadas em vários pacientes sem atividade da doença clínica conhecida ou nefrite ativa. O significado dessas células é ainda desconhecida, no entanto, é tentador especular se eles refletem a inflamação subclínica. Ou, pelo contrário, estes macrófagos também podem exercer efeitos anti-inflamatórios, a protecção do rim contra chamas renais.
Com base nos nossos resultados, uma percentagem elevada de células T CD4 + na urina de pacientes de SLE parece ser do fenótipo de memória efectora. Isto combina os resultados de um relatório recente sobre LN [ 12 ] e observações semelhantes que foram feitas no AAV aguda [ 19 ]. Quanto maior activação (CD40L +) e proliferação (Ki67 +) das células T CD4 + urinário indicados nos resultados é plausível, considerando o contexto inflamatória e em geral maior expressão de CD40L em células T em LN proliferativa [ 25 ]. Além disso, uma quantidade variável de Foxp3 + CD127- Treg foi encontrado na urina (Figura 3 ), para além efectoras de células T CD4 +, que se correlacionou com a actividade da doença.
As células T urinário já foi classificado como um excelente biomarcador para o diagnóstico LN proliferativa entre os pacientes com LES [ 10 , 11 ]. No presente estudo, a contagem de células T CD8 + urinária foi ligeiramente superior às células T CD4 + como um biomarcador para LN activo. Notavelmente, os dois tipos de células T apresentaram melhor desempenho no diagnóstico LN de proteinúria ou creatinina. Além disso sub fenotipagem de células T CD4 + como urinárias realizada neste estudo pode ser útil para uma melhor compreensão da patogénese LN, mas não melhora as células T como um biomarcador. Outros tipos de células urinária não aguentou o alto padrão de células T urinárias: enquanto a contagem de células B são urinária na maioria dos casos muito baixa em pacientes LN ativos para distingui-los suficientemente de outros pacientes com LES, a alta de macrófagos urinária contar em alguns pacientes com LES não activo conduz a um grande número de resultados falsos positivos.
Em uma coorte limitado fomos capazes de investigar se determinadas células do sistema imunológico na urina pode ser preditivo de um determinado curso clínico. Curiosamente, as células T ligeiramente elevados parecia potencialmente prever erupções renais, que precisam ser analisados no futuro. Obviamente, o tamanho da amostra e desenho do estudo era inadequado para fazer uma conclusão definitiva, mas essas observações são gerador de hipóteses.
A ocorrência de células urinárias em outras doenças já foi descrita anteriormente [ 10 , 19 , 26 , 27 ]. Aqui comparamos a composição celular urinária de LN com outras nefropatias associadas a uma infiltração inflamatória: No que diz respeito as células urinárias, AAV parece ser uma doença semelhante ao LN. Contagem de células T correlacionando com a atividade da doença foram relatados por ambos os manifestações renais [ 10 , 13 , 19 ] e nenhuma diferença na composição celular na urina foi observado em nosso estudo. DN é cada vez mais considerada uma doença inflamatória [ 28 ]. Em um estudo recente, Lua et al . indicaram que a infiltração intra-renal e a activação de células T no interstício é o principal mecanismo de lesão renal e mostrou uma infiltração de células renais predominante de células CD4 + T em ratinhos com diabetes induzida por [ 29 ]. De acordo com esses relatórios, identificamos várias quantidades de leucócitos urinário em pacientes com DN. A avaliação de células urinárias em pacientes DN revelou que as contagens de células totais são mais baixos do que em pacientes LN mas com proporções de células T, células B e macrófagos são comparáveis. A proporção de células T CD8 + CD4 + urinário e marca a única excepção. Considerando a CD4 / CD8-rácio diminuiu no sangue periférico de pacientes com LES [ 30 ], esta descoberta não é surpreendente. No entanto, estas diferenças na composição das células T urinário pode ser útil na distinção urinária de outra forma difícil entre LN e outras doenças: A / CD8-relação CD4 é um quociente normalmente utilizado no monitoramento de linfócitos T em pacientes HIV-positivos ou como um marcador para o diagnóstico de sarcoidose através de lavagem brônquica [ 31 , 32 ]. No entanto, quando aplicado para células T urinário, a proporção difere significativamente entre pacientes com SLE e DN e reflecte as diferenças nos respectivos infiltrados intra-renal. Outras razões, como a relação urinária CD14 / CD3, que foi classificado como útil no diagnóstico diferencial das doenças glomerulares [ 26 , 27 ] não deu resultados significativos. No entanto, nossos dados, tanto para DN e AAV foram restringidos pelo baixo número de doentes e precisam de ser confirmados por estudos futuros.
Conclusão
Nossos dados apresentam uma visão abrangente de células urinárias no LES. As células T urinário, especialmente células CD8 +, manter o seu papel principal como biomarcadores para urinários celulares LN proliferativa, apesar de ambas as células B e macrófagos pode ser detectado na urina. Em um futuro próximo, esse monitoramento não-invasivo de compostos urinário pode se tornar uma ferramenta útil para facilitar as decisões clínicas sobre biópsias renais e tratamento de LN.
Declaração de partilha de dados
Os dados não mostrados no manuscrito incluem análise de correlação de vários tipos de células urinária com as respectivas pontuações de actividade da doença, as comparações de CD3 urinária / CD14 e rácios CD3 / CD19 entre SLE, DN e AAV e a expressão de CD28 em células T CD4 + e células T CD8 +. Estes dados estão disponíveis via e-mail para o autor correspondente.
Agradecimentos
Agradecemos a todos os pacientes para doações de amostras. Este trabalho foi apoiado pelo Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 650) e doações do Hospital Universitário Charité de Berlim e Stiftung Charité.
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